Estudio del patrón de citocinas (Th1/Th2) producido por linfocitos T periféricos y del existente en tejido tumoral de pacientes con melanoma en diferentes estadios* / Th1/Th2 Cytokine production by peripheral T lymphocytes and tumoral tissue from patients with melanoma in different clinical stages

Objetivos. La diferenciación de las células T en los patrones Th1 o Th2 según su patrón de producción de citocinas se ha demostrado muy importante en la regulación de las respuestas inmunes. Hemos estudiado si existe una diferencia entre sujetos controles y pacientes con melanoma en la expresión de estas citocinas, tanto en sangre periférica (mediante citometría de flujo) como en biopsias de los tumores (mediante RTPCR cuantitativa a tiempo real).Métodos. En la primera parte del estudio se incluyeron 25 pacientes 6 eran controles y 19 habían sido diagnosticados de melanoma. Para la citometría de flujo se obtuvieron muestras de sangre de los 25 pacientes y se realizó una activación durante 4 horas con PMA + ionomicina en presencia o ausencia de un inhibidor de la secreción de proteínas (GolgiStop). Tras realizar un marcaje de superficie (CD3-Cy5+CD8-FITC) y una fijación y permeabilización (CytoFix-CytoPerm) las células fueron teñidas con anticuerpos marcados con ficoeritrina frente a las citocinas caracteríticas del patrón Th1 (IL-2, IFN, TNF-) y frente a las del patrón Th2 (IL-4, IL-10). En la segunda parte del estudio se incluyeron ocho biopsias cutáneas dos controles, tres melanomas cutáneos localizados y tres metástasis cutáneas de melanoma. Tras extraer el ARN total, se estudiaron mediante una técnica de RT-PCR cuantitativa a tiempo real los tránscritos (mARN) de las siguientes citocinas IL-2, IFN- , TNF-, IL-4, IL-5, IL-10.Resultados. Los datos más relevantes de la primera parte del estudio se relacionan con la producción de IFN y de IL-10. El porcentaje de células productoras de IFN era significativamente menor en los pacientes con melanoma, independientemente de su estadio, en relación con los controles. La producción de IL-10 se encontraba significativamente elevada en los pacientes con melanoma en comparación con los donantes sanos. Se observó una tendencia a un aumento en la producción de IL-10 en los estadios más avanzados de la enfermedad. La segunda parte del estudio mostró la existencia de un patrón Th2 o Th0 en las biopsias tanto de melanomas localizados como en las metástasis cutáneas. Conclusiones. Nuestros datos sugieren que los linfocitos activados de los pacientes donantes sanos tienden a exhibir un fenotipo Th1, mientras que en los pacientes con melanoma se observa un aumento en la proporción de linfocitos productores de una citocina característica del patrón Th2 como es la IL-10, con reconocidas propiedades inmunosupresoras. El análisis del propio tumor apoya estos resultados, ya que el patrón hallado con mayor frecuencia es el Th2 (AU)